Comment faire pour résoudre électrophorèse

December 13

Comment faire pour résoudre électrophorèse


L'électrophorèse est une technique puissante pour séparer des molécules d'ADN. Pour commencer, les scientifiques font des gels d'agarose avec puits d'échantillon. Ces gels ont des pores qui permettent aux molécules de passer à travers microscopiques. Une fois que l'ADN est chargé dans les puits, une charge est appliquée sur le gel. Comme l'ADN est chargé négativement, il migre à travers l'agarose vers le côté positif du gel. Grandes molécules prennent plus de temps à se faufiler à travers les pores agarose, afin qu'ils migrent une distance plus courte que des fragments plus petits, séparant ainsi l'ADN basée sur la taille. Bien que de nombreux biologistes effectuent électrophorèse fréquemment, les complexités de l'électrophorèse peuvent intimider les débutants.

Instructions

Pâle ou sans bandes

1

Augmenter le temps de l'exposition sur votre appareil photo. Tout comme augmentant l'exposition sur un appareil photo classique vous permet de capturer des sources de lumière plus faible, un temps d'exposition plus long sur votre appareil photo de gel peut révéler vos bandes.

2

Ajouter plus d'ADN à votre gel. Certaines réactions et des échantillons fonctionnent mieux que d'autres, de sorte que vous pouvez doubler la quantité d'ADN que vous ajoutez à votre gel pour prendre un échantillon sous-performant qui fonctionne toujours.

3

Exécutez votre gel pour une période de temps plus courte pour se assurer que votre ADN ne fonctionne pas du fond du gel. Beaucoup de débutants (et experts distraits) font cette erreur. Étant donné que l'ADN chargé négativement est attiré vers le bas chargé positivement du gel, elle migre à travers les pores d'agarose vers le bas. Toutefois, si vous ne éteignez pas le courant dans le temps, votre ADN va migrer dès le bas de votre gel.

Bandes tachée

4

Diminuer la quantité d'ADN sur votre gel. Exécution d'électrophorèse avec de très grands volumes de l'ADN, il est difficile pour eux de se séparer efficacement sur un gel.

5

Traitez votre ADN avec la protéinase K ou d'une autre protéase commun. Cette étape élimine deux problèmes possibles: Proteinase K dégrade toutes les protéines qui contaminent votre ADN et il mange aussi des nucléases qui dégradent l'ADN en fragments plus petits.

6

Vérifiez les paramètres de votre boîte de gel et d'examiner votre gel. Si vous réglez la tension sur votre boîte de gel supérieure à 120-130 volts ou votre gel est chaud au toucher, le gel pourrait fondre et provoquer l'ADN à frottis. Abaisser la tension sur votre boîte de gel pour résoudre ce problème. Électrophorèse prendra plus de temps à une tension inférieure mais produit une lecture plus précise de la taille de vos ADN.