Comment traduire l'ARNm en protéines

August 8

Comment traduire l'ARNm en protéines


Nos gènes codent pour des protéines qui sont utilisées dans nos cellules pour exécuter des fonctions telles que le métabolisme énergétique, la biosynthèse et la division cellulaire. Les protéines sont construites à partir d'acides aminés joints par des liaisons peptidiques. "Traduction" est un processus par lequel un acide ribonucléique messager (ARNm), qui est essentiellement une copie du gène particulier, est utilisé comme matrice pour construire une protéine. Dans la nature, la traduction des protéines passe à l'intérieur d'une cellule vivante, mais les biologistes moléculaires ont appris à faire des protéines dans le laboratoire. Cette technique est utilisée pour l'identification rapide de produits de gènes, des études de repliement des protéines, des études de mutation et des études fonctionnelles.

Instructions

1

Combinez tous les composants dans un tube à centrifuger: Pipet 35 microlitres de réticulocytes de lapin Système Lysate, 0,5 microlitres des mélanges d'acides aminés, 1 microlitre de RNasin, 2 microlitres d'ARNm et 1 microlitre de l'ARNt ensemble, et mélanger. Le système réticulocytes Lysate Lapin comprend toutes les molécules que l'on trouve dans nos cellules et nécessaires pour la traduction, y compris les ribosomes et les facteurs d'initiation. Cette étape va préparer tout soit prêt pour la traduction. Votre molécule d'ARNm se fixe à un ribosome, et les facteurs d'initiation assembler. Molécules appelées ARNt sont associés à leurs acides aminés et sont prêts à construire la protéine.

2

Chauffer le mélange réactionnel à 30 degrés Celsius. La traduction va commencer lors de cette étape. Le message de l'ARNm est «lu» par les ARNt. Chaque porte-ARNt d'un acide aminé, et ces acides aminés sont joints ensemble pour former la protéine.

3

Attendre 90 minutes pour la traduction de procéder. Les ARNt gardent apporter de nouveaux acides aminés en fonction du message de l'ARNm. Une fois l'ARNm est entièrement lu, la traduction se termine et la protéine est prêt.

4

Purifier votre protéine par SDS-PAGE. Elle est prête pour les essais fonctionnels.

Conseils et avertissements

  • Techniques de clonage moléculaire sont sensibles et nécessitent un environnement stérile. Portez des gants et une blouse de laboratoire.
  • Ne pas manger ni boire pendant le travail en laboratoire.